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了解一下酶聯免疫吸附試驗的基本原理吧

發布時間:2023-03-08 點擊量:170
  自從Engvall和Perlman(1971)報道建立酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-LinkedImmunosorbentAssays,ELISA)以來,由于ELISA具有快速、敏感、簡便、易于標準化等優點,使其得到迅速的發展和廣泛應用。
 
  盡管早期的ELISA由于特異性不夠高而妨礙了其在實際中應用的步伐,但隨著方法的不斷改進、材料的不斷更新,尤其是采用基因工程方法制備包被抗原,采用針對某一抗原表位的單克隆抗體進行阻斷ELISA試驗,都大大提高了ELISA的特異性,加之電腦化程度高的ELISA檢測儀的使用,使ELISA更為簡便實用和標準化,從而使其成為廣泛應用的檢測方法之一。
 
  如今ELISA方法已被廣泛應用于多種細菌和病毒等疾病的診斷。在動物檢疫方面,ELISA在豬傳染性胃腸炎、牛副結核病、牛傳染性鼻氣管炎、豬偽狂犬病、藍舌病等的診斷中已為廣泛采用的標準方法。
 
  下面讓我們一起來了解一下酶聯免疫吸附試驗的基本原理吧
 
  ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結合,此種結合不會改變抗體的免疫學特性,也不影響酶的生物學活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發生特異性結合。
 
  滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型,出現顏色反應。因此,可通過底物的顏色反應來判定有無相應的免疫反應,顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。
 
  此種顯色反應可通過ELISA檢測儀進行定量測定,這樣就將酶化學反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結合起來,使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。
 
  特性
 
  用于標記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩定;反應產物易于顯現;能商品化生產。如今應用較多的有辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP應用廣。
 
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